Toru NishikawaEl equipo fue publicado en".Revista del Colegio Internacional de OdontologíaLibroInvestigaciónA través de la estreptozotocina..STZ) inducir el establecimiento de un modelo de rata diabética, en el que se induce Periodontitis experimental, con óxido nítricoNO) el acceso esPuntos claveExplorar el mecanismo de deterioro de la enfermedad periodontal en el Estado de diabetes, centrándose en el análisis del flujo sanguíneo gengival, los genes relacionados con la inflamación (factor de necrosis tumoral)α/TNF-α, óxido nítrico sintasa inducido/ iNOS) expresión y cambios en los marcadores de estrés nitroso (nitrotirosina).

resumen

"Objetivo" para aclarar el mecanismo de deterioro de la enfermedad periodontal en la diabetes, este estudio se llevó a cabo a través de la estreptozotocina.STZ) inducir el establecimiento de un modelo de rata diabética, en el que se induce Periodontitis experimental y se administra óxido nítricoNO) el acceso esPuntos claveIniciar una discusión.

"Materiales y métodos" correcto 5 Zhou lingxiongSDRatas, inyectadas por vía intraabdominalSTZ()60 mg/kg) inducir diabetes.STZInyección2 Semanas después, segundo molar en el lado derecho de la mandíbula superior..M2) ligadura del hilo de nylon en el cuello de los dientes..3 - 0 surgiron) para inducir Periodontitis experimental, este lado se utiliza como lado experimental; El otro lado no se trata como el lado de control. Inducción experimental de Periodontitis2 Después de la semana, se midió el flujo sanguíneo del tejido gingival, y luego se ejecutó a las ratas para el análisis de expresión genética y el examen histológico del tejido gingival.

Resultados el flujo sanguíneo gingival en el lado de control de las ratas diabéticas fue significativamente menor que en el lado de control de las ratas normales; Tanto en ratas normales como en ratas diabéticas, el flujo sanguíneo del tejido gingival aumentó significativamente después de la inducción de la Periodontitis en comparación con sus respectivos lados de control. El análisis de expresión genética mostró que en ratas normales, después de la inducción de la PeriodontitisTNF-αAunque la expresión génica tiende a aumentar, no hay diferencias estadísticas, mientras queiNOSLa expresión génica aumentó significativamente; En ratas diabéticas, después de la inducción de la PeriodontitisTNF-αyiNOSLa expresión génica aumentó significativamente. El examen histológico mostró que solo se vio infiltración de células inflamatorias leves en el sitio inducido por Periodontitis en ratas normales, mientras que se vio infiltración de células inflamatorias significativas en el sitio de ratas diabéticas. Un análisis más detallado de la expresión de nitrotirosina en el tejido gingival encontró que las células positivas de nitrotirosina se podían ver en el sitio de inducción periodontal de las ratas normales, pero el número de células positivas de nitrotirosina aumentó significativamente en las ratas diabéticas después de la inducción periodontal.

"Conclusión" este estudio confirma que el número de células positivas de nitrotirosina en el tejido gingival del lado experimental de las ratas diabéticas ha aumentado significativamente, lo que sugiere que el estrés nitroso juega un papel importante en el proceso de diabetes combinada con enfermedad periodontal; Al mismo tiempo, se sugiere que la inhibición del estrés nitroso puede convertirse en una de las estrategias terapéuticas para la Periodontitis relacionada con la diabetes.

ExperimentoMateriales e instrumentos

I) materiales experimentales

1. Animales de experimentación:5 Zhou lingxiongSDRatas

2. Inductor de la diabetes: estreptozotocinaSTZ(...)V;Material inducido por enfermedad periodontal: sutura de nylon3 - 0 surgiron(...)V;Anestésicos:pentobarbital(...)

Ii) instrumentos experimentales

1. Omegawave FLO-N1Hemograma Doppler láserPara medir el flujo sanguíneo del tejido de las encías

Omegawave FLO-N1Hemograma Doppler láser

Valores de flujo sanguíneo en el tejido de las encías

2. Cuantificación por fluorescencia en tiempo realPCRInstrumento: análisis cuantitativo de la expresión génica

3. Microscopía óptica: para observación y recuento celular después de teñir secciones de tejido

4. Equipo de almacenamiento a baja temperatura: tanque de nitrógeno líquido (para la congelación rápida de tejidos),-80℃Refrigerador (para la conservación a largo plazo de tejidos)

5. Almohadilla de calentamiento: se utiliza para mantener la temperatura rectal de la rata a la hora de medir el flujo sanguíneo de las encías.37℃

Proceso experimental

I) cría de animales experimentales y establecimiento de modelos de diabetes

1. todoSDLas ratas se crían a temperatura constante..23±1.0℃), humedad constante..45 ± 10%) la Sala de animales, con12 El ciclo alternativo de luz y oscuridad por hora proporciona agua del grifo a través de un dispositivo automático de suministro de agua.

2. Inyección intraabdominal en ratasSTZ()60 mg/kg) para inducir diabetes;STZInyección1 Después de la semana, se detectaron los valores de azúcar en sangre de las ratas y se administró azúcar en sangre.≥200mg/dLLas ratas fueron identificadas como ratas modelo diabéticas y se incluyeron en experimentos posteriores.

(2) inducción experimental de Periodontitis

STZInyección2 Después de la semana, se administró a todas las ratas (ratas normales).- sí.Ratas diabéticas) tratadas: en..0,5 mg / kg, inyección intraabdominal) bajo anestesia, segundo molar en el lado derecho del maxilar..M2) sutura de nylon envuelta en el cuello de los dientes..3 - 0 surgiron), trate de evitar dañar las encías y anule y fije cerca de la tapa de la boca del corazón (este lado es el lado experimental); El segundo molar izquierdo de la mandíbula superior no se trata (lado de control).

(3) medición del flujo sanguíneo del tejido gingival

1. Después de la inducción de la periodontitis, se administra por inyección intraabdominal..0,5 mg / kg) anestesiar a las ratas y aplicar un hemograma Doppler láser..FLO-N1La sonda se fija en el lado experimental y en el lado de control.M2Justo por encima de las encías de la mejilla.

2. Durante la medición, las ratas fueron colocadas en25℃Almohadilla de calentamiento para mantener la temperatura del recto37℃, registrar el valor del flujo sanguíneo (unidad:ml/min/100g tejido).

(4) organizar la recolección y el procesamiento

1. Inducción experimental de Periodontitis 2 Semanas después, por inyección intraabdominal..1,5 mg / kg) ejecutar ratas.

2. Lado experimental y lado de control de la recolecciónM2Tejido de las encías bucales: una parte se coloca inmediatamente en nitrógeno líquido para congelar rápidamente y luego se transfiere a- 80℃Conservación en refrigerador (para análisis de expresión genética); La otra parte se retira junto con el tejido maxilar bilateral y se coloca10%Fijación de la solución de formalina24 Horas (para análisis organizativos).

V) análisis de la expresión génica

1. usarReactivo TRIzolExtracción total del tejido de las encías congeladasARN, y luego en totalARNComo plantilla, conRNasa H-transcriptasa inversasíntesisADNc.

2. adoptarMezcla maestra universal de PCR TaqManyTaqManSonda, enABI Prisma 7000Realizado por instrumentosPCRReacción, las condiciones de reacción son95℃ 1Minutos,52℃ 1Minutos,72℃ 30Segundos, un total40 Un ciclo.

3. ConGAPDHEs el gen del ginseng interno, que utilizaΔΔCtCálculo por métodoTNF-αyiNOSLa cantidad relativa de expresión de los genes.

Conclusiones experimentales

Este estudio confirmó que el número de células positivas de nitrotirosina en el tejido gingival del lado experimental de las ratas diabéticas aumentó significativamente, lo que sugiere que el estrés nitroso juega un papel importante en el proceso de diabetes combinada con enfermedad periodontal; Al mismo tiempo, se sugiere que la inhibición del estrés nitroso puede convertirse en una de las estrategias terapéuticas para la Periodontitis relacionada con la diabetes.