(1) necesidades nutricionales

· aminoácidos - 12 aminoácidos esenciales (valina, leucina, isoleucina, treonina, lisina, triptófano, fenilalanina, metionina, histidina, tirosina, arginina, cisteína); 10 aminoácidos no esenciales; Además, se necesita glutamina, que juega un papel importante en el metabolismo celular, y el nitrógeno que contiene es la fuente de la síntesis de Purinas y Pirimidinas en ácidos nucleicos, y también es la sustancia básica necesaria para la síntesis de trifosfatos, difosfatos y monoglicósidos.

· carbohidratos - azúcares - glucosa; Galactosa; Las células tienen la mayor capacidad de absorción de glucosa y baja galactosa.

· sales inorgánicas - sodio, potasio, magnesio, fósforo, calcio, etc.;

· vitaminas - biotina, ácido fólico, riboflavina, vitamina c, vitamina b12, piridoxina, etc.;

· proteínas y péptidos - albúmina, aprotinina, globulina fetal, fibronectina, transferrina, factor de crecimiento;

· ácidos grasos y lípidos - ácido linoleico, ácido oleico, colesterol, etc.;

· oligoelementos - hierro, zinc, selenio, cobre, manganeso, molibdeno, vanadium, etc.

(2) temperatura

La temperatura común es de 37 °, pero hay que prestar atención a las células de tejido de diferentes fuentes biológicas, la temperatura de cultivo más adecuada es diferente, y las células son resistentes a bajas temperaturas y no a altas temperaturas. Dentro del rango de temperatura fisiológica, la temperatura está positivamente relacionada con la tasa de crecimiento celular.

(3) presión osmótica

El tamaño de la presión osmótica está determinado principalmente por la concentración de varios componentes salinos en el medio de cultivo. Las células deben vivir en un entorno osmótico con su propio protoplasma. si la presión osmótica del entorno de vida es mayor que la suya, las células cultivadas pueden enfrentar la deshidratación y la muerte. si la presión osmótica del entorno de vida es menor que la suya, las células cultivadas pueden enfrentar la absorción de agua y la muerte, pero la mayoría de Las células cultivadas tienen cierta tolerancia a la presión osmótica. La presión osmótica del plasma humano es de 290 mosm / kg, que puede considerarse como la presión osmótica ideal para cultivar células humanas. La presión osmótica de las células de ratón es de unos 320mosm / kg. Para cultivar la mayoría de las células de mamíferos, es apropiado controlar la presión osmótica del medio de cultivo en un rango de 260 - 320mosm / kg.

(4) fase gaseosa

El ambiente de fase gaseosa del Cultivo celular in vitro a menudo se compone de 5% de CO2 y 95% de aire. Entre ellos, el O2 participa en el proceso metabólico energético de la célula. El CO2 se utiliza para mantener el pH del medio de cultivo.

(5) pH

El pH del medio adecuado para el crecimiento de la mayoría de las células está entre 7,0 y 7,4, y el entorno de pH 7,4 es adecuado para la mayoría de las líneas celulares de mamíferos. El rojo fenol se utiliza en el medio de cultivo como indicador del pH para monitorear continuamente el pH del medio de cultivo, el rojo fenol hace que el medio de cultivo sea amarillo a un pH bajo, mientras que a un pH más alto hace que el medio de cultivo sea morado y rojo a un pH de 7,2 - 7,4, adecuado para El cultivo celular.

(6) no tóxico y no contaminado

La no toxicidad y la asepsia son requisitos previos para el cultivo de células in vitro. En el sistema de desintoxicación y el sistema inmunológico de las células vivas, puede resistir la invasión de microorganismos u otras sustancias nocivas, pero las células, en cultivo in vitro, carecen de la protección del sistema inmunológico del organismo, perdiendo así la capacidad de defensa contra los microorganismos y la capacidad de desintoxicación contra las sustancias nocivas. Por lo tanto, garantizar que el entorno de crecimiento de las células no sea tóxico ni contaminado es la condición principal para el éxito del cultivo celular. En el proceso de cultivo celular, debemos prestar atención a prevenir la contaminación por productos químicos tóxicos, la contaminación microbiana y la contaminación cruzada entre diferentes células.