I. preparación antes de subir al tanque
1. preparación de suspensión celular: recoger las células cultivadas previamente de una botella de agitación o placa de petri, mezclar bien y tomar 1 ML para el recuento celular, asegurando que la densidad de vacunación es adecuada.
2. esterilización de equipos: compruebe si el tanque del reactor, las tuberías y los electrodos han sido esterilizados (como el tratamiento de vapor de alta presión a 121 ° c) para evitar la contaminación microbiana.
3, medio de cultivo y amortiguador: preparar un medio de cultivo suficiente y ajustar el pH al rango objetivo (por ejemplo, 7.2 - 7.4), enfriar y reservar después de la esterilización.
II. vacunación y cultivo inicial
1, operación aséptica: en el Gabinete de bioseguridad, la suspensión celular se transfiere al reactor a través de una tubería aséptica y se introduce aire comprimido para ayudar a la mezcla.
2. configuración de parámetros:
temperatura: las células de mamíferos generalmente se establecen en 37 ° c.
oxígeno disuelto (do) se establece inicialmente en el 40% y se mantiene estable a través de la mezcla de gases (o n C / co c).
control del ph mantener el pH en 6,5 - 7,0 (ajuste por tipo de célula) utilizando una bomba peristáltica para complementar el ácido / álcali o introducir la regulación de co2.
III. monitoreo del proceso de capacitación
1. muestreo periódico: muestreo en línea cada 24 horas para detectar la densidad celular, el pH y la concentración de metabolitos (como glucosa y ácido láctico).
2. suplementos de flujo: según el consumo nutricional, el medio de cultivo concentrado de flujo o ingredientes específicos (como aminoácidos) prolongan el período de crecimiento logarítmico celular.
- 3. control de la fuerza de cizallamiento: agitar a baja velocidad (por ejemplo, 50 - 100 rpm) o reactor ondulado para evitar daños mecánicos.
IV. cosecha y limpieza
1. terminar el cultivo: apagar el sistema de control automático cuando la célula entra en la vida de desintegración o la acumulación de productos alcanza su punto máximo.
2. descarga y recogida: descarga del medio de cultivo en el cubo de residuos líquidos a través de aire comprimido para separar las células del líquido de limpieza superior.
3. limpieza y esterilización: lavar el tanque y los componentes con agua purificada y remojar 0,1m de hidróxido de sodio durante la noche para garantizar que no haya residuos.
V. precauciones
1. operación aséptica: es necesario evitar estrictamente la contaminación durante todo el proceso y desinfectar guantes y herramientas antes de la operación.
2. calibración de parámetros: verifique regularmente el pH y los Electrodos de oxígeno disuelto para garantizar que los datos sean precisos.
3. ampliar la producción: la operación por lotes se puede ampliar directamente a la escala industrial (como 12000 l), pero es necesario optimizar la eficiencia de agitación y transferencia de masa.
A través de los pasos anteriores, el funcionamiento del reactor biológico de cultivo celular se puede completar de manera eficiente, adecuado para la producción de anticuerpos monoclonales, vacunas y otros productos biológicos.