Utilizar el puntoLUNA-FX7 ™ El contador automático de células optimiza la evaluación de los espermatozoides

Palabras clave: contador automático de células, evaluación de espermatozoides basada en imágenes, recuento celular, evaluación de supervivencia, doble teñido

1 Introducción

La evaluación de los espermatozoides (también conocida como análisis de semen) juega un papel importante en el juicio del potencial reproductivo masculino. Aunque no es un indicador directo de la fertilidad, la fertilidad masculina tiene un impacto importante en la fertilidad humana y la cría ganadera, por lo que la evaluación de los espermatozoides ha atraído mucha atención.

En la actualidad, la evaluación de los espermatozoides se puede realizar a través de la citología por flujo y herramientas de análisis basadas en imágenes. Punto en luna - fx7 ™ Los equipos automatizados, como los contadores automáticos de células, pueden utilizar imágenes para analizar muestras de esperma de manera rápida y conveniente. Sin embargo, debido a la singularidad morfológica y característica de las células espermatozoides en comparación con las células de mamíferos, es necesario optimizar los parámetros de análisis y seleccionar los tintes adecuados.

Este estudio realizó un análisis comparativo de tintes fluorescentes como sybr14, naranja de acridina (ao) e yoduro de propidina (pi) para optimizar el punto en luna - fx7. ™ Capacidad de evaluación de los espermatozoides. El objetivo de este estudio es evaluar la efectividad de diferentes combinaciones de tintes y optimizar la configuración de parámetros para la evaluación de espermatozoides.

2 Métodos y materiales

2.1 Preparación de muestras

Descongelar muestras de semen congelado de ganado vacuno y reemplazar el amortiguador con pbs. Las muestras de semen se diluyeron en el PBS en una proporción de aproximadamente 1: 20 a 1: 40, dependiendo de la situación de la muestra.

2.2 Teñido fluorescente

1. mezcla:

Espermatozoides en PBS de 18 μl

Tintes fluorescentes verdes y rojos mezclados con 2 μl

2. incubar a 37 ° C durante 10 minutos

3. cargar la muestra en una lámina de vidrio adecuada

4. use el punto en luna - fx7 ™ Realizar análisis

Tabla 1. haga clic en luna - fx7 ™ Configuración de parámetros optimizados para la evaluación de espermatozoides en modo avanzado

3 Optimizar los protocolos de recuento celular y las combinaciones de tintes para la evaluación de espermatozoides

Resumen: las manchas dobles sybr14 / PI y ao / PI son adecuadas para la evaluación de la vitalidad espermática, pero sybr14 / PI tiene un mejor desempeño.

Punto en luna - fx7 ™ El Protocolo predeterminado se ha optimizado para las células de mamíferos comunes, pero la evaluación de los espermatozoides requiere ajustar parámetros como el nivel de exposición, el tamaño celular y la sensibilidad a la desgranación. Por ejemplo, se ajusta el tamaño mínimo de búsqueda de 3 micras a 7 micras y la sensibilidad de desgranación de 5 a 7 para mejorar el rendimiento de detección (tabla 1). Además, los niveles de exposición de los tintes sybr14 / PI y ao / PI se establecen en GF 6 y RF 9, respectivamente.

Sobre esta base, comparamos y analizamos los métodos de teñido sybr14 / PI y ao / pi. Dada la eficacia conocida del método de Tinción sybr14 / PI en la evaluación de espermatozoides, estamos preocupados por el desempeño del método de Tinción ao / pi. Los resultados del estudio muestran que ambos métodos de teñido se pueden utilizar para la evaluación de espermatozoides (figura 1). Sin embargo, la aplicabilidad de sybr14 en la Tinción de espermatozoides es mejor que la de ao, lo que sugiere que las propiedades químicas de sybr14 pueden ser más adecuadas para esta aplicación.

Figura 1. imagen fluorescente de espermatozoides teñidos con dos tintes diferentes (sybr14 / PI y ao / pi). La imagen combinada muestra el campo brillante, la luz verde, la luz roja y la imagen marcada después del análisis. La imagen marcada es una imagen de canal fluorescente compuesto, en la que el círculo rojo indica células muertas y el círculo Verde indica células vivas.

4 Conclusiones

Este estudio encontró que los métodos de Tinción sybr14 / PI y ao / PI se pueden utilizar para evaluar la supervivencia de los espermatozoides, pero el rendimiento de sybr14 / Pi es mejor. Además, el ajuste del nivel de exposición y otros parámetros es crucial para el rendimiento general de la detección. Aunque el punto es luna - fx7 ™ No está dirigido específicamente a la optimización de muestras de espermatozoides, pero a través de la optimización de la proporción de dilución de muestras recomendada y las condiciones de imagen, todavía puede proporcionar un programa de evaluación de espermatozoides rápido y conveniente.