Experimento de elisa: el problema de la curva de Elisa

Hay un problema con la curva en el experimento de elisa, la mayoría de los cuales son productos estándar, operaciones o equipos que no están en su lugar. Conclusión central: el problema de la canción estándar generalmente radica en el tratamiento de los productos estándar, la operación de adición de muestras o las condiciones de incubación, y centrarse en la inspección de estos enlaces puede localizarse rápidamente.

I. causas comunes de la mala curva estándar

Disolución y dilución inadecuadas de los productos estándar.

El polvo estándar no se disuelve completamente o no se mezcla bien cuando se diluye, lo que resulta en una concentración inexacta.

Recomendación: siga las instrucciones con la dilución especificada, centrifugar brevemente después de la disolución, diluir con una nueva cabeza de pistola al gradiente, soplar o mezclar bien con el vórtice.

La operación de adición de muestra es inexacta.

El pipeta no está calibrado, o la velocidad y el ángulo de la muestra son inconsistentes, y el volumen entre los agujeros es muy diferente.

Recomendación: calibrar la pipeta regularmente, añadir muestras verticalmente y constantemente, la cabeza de la pistola se adhiere al nivel del líquido pero no toca el fondo, evitar burbujas.

Las condiciones de incubación no son constantes.

No hay película de sellado o tapa laxa, lo que resulta en un efecto de borde; El tiempo de temperatura es inestable.

Se recomienda sellar la película de la placa con alta calidad y poner una incubadora de temperatura constante en la placa estándar de la enzima para evitar la incubación natural.

2. otros problemas de curva comunes y contramedidas

Bajo en general

Posibles causas: caducidad del reactivo, no disolución del estándar, no detección inmediata después de terminar la solución, mezcla del reactivo.

Recomendación: conservar el reactivo de acuerdo con las instrucciones, centrifugar el estándar antes de disolverlo, añadir el diluyente y mezclar bien, y detectarlo inmediatamente después de terminar el líquido.

Sin señal

Posibles causas: caducidad del reactivo, contaminación de la enzima hrp, error de operación (por ejemplo, orden de adición incorrecta).

Recomendación: revisar la etiqueta del reactivo, dispensar un amortiguador con agua destilada fresca y equilibrar el reactivo a temperatura ambiente durante 30 minutos.

El conjunto es alto.

Posibles razones: el rango de densidad óptica del medidor de estándar enzimático es demasiado amplio, la concentración del líquido de trabajo es alta y el tiempo de incubación es largo / temperatura es alto.

Se recomienda: el rango de densidad óptica es de 0 - 3,5, el líquido de trabajo se distribuye ahora y la temperatura de la incubadora se controla en 37 ± 0,5 grados celsius.

III. recomendaciones de optimización

Tratamiento estándar: centrifugar antes de disolver, añadir diluyente y mezclar bien.

Operación de llenado de muestras: calibrar el pipeta, añadir muestras verticalmente y suavemente, evitar burbujas.

Condiciones de incubación: sellar con película de placa de sellado y poner una incubadora de temperatura constante en la placa estándar de la enzima.

Inspección del equipo: calibrar regularmente el pipeta y establecer el rango correcto de densidad óptica en el medidor estándar enzimático.

Nota: lo anterior es solo para referencia. este producto es solo para investigación científica y no se utiliza como datos reales. los experimentos deben seguir estrictamente las instrucciones o consultar a los profesores técnicos.

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