Instrucciones técnicas del kit de prueba Elisa de la enzima de Glicosilación cetona 1,5 - difosfato vegetal (rubisco)

BS - 4938 planta 1,5 - difosfato de cetona carboxilasa (rubisco) kits Elisa 96t / 48t

Resumen del producto

Este kit se utiliza para la detección cuantitativa in vitro de la actividad de la cetonosa nuclear - 1,5 - difosfato de carboxilasa / Oxigenasa (rubisco) en tejidos vegetales, células y muestras líquidas relacionadas. Esta enzima es una enzima clave en el ciclo Calvin de la fotosíntesis vegetal, y su actividad afecta directamente la tasa de fotosíntesis y el proceso de fotorespiración. Este Kit utiliza el método de inmunoabsorción enzimática sandwich de doble anticuerpo (elisa), que tiene una alta sensibilidad y especificidad.

Principio de detección

El kit utiliza el método de sándwich de un paso de doble anticuerpo:

Preenvasar la enzima objetivo en la muestra capturada con microplaca resistente al Anticuerpo monoclonal RuBisCO

Los anticuerpos de detección marcados con HRP se unen para formar el complejo 'anticuerpos - antígenos - anticuerpos marcados con enzimas'.

Después del lavado limpio, se añade el sustrato de color tmb.

Después de la terminación de la reacción, El medidor de estándar enzimático determina la absorción (valor de od) a una longitud de onda de 450 nm.

La concentración de RuBisCO en la muestra está positivamente relacionada con el valor de od.

Composición del kit

Condiciones de conservación de las especificaciones de los componentes

Placa microporosa preenvasada 12 × 8 agujeros 4 ℃.

Estándar (6 gradientes de concentración) 0,3 ML × 6 tubos - 20 ℃.

Anticuerpos marcados con enzima 15 ML 4 ℃.

20 × tampón de lavado 50 ml a temperatura ambiente

El líquido de color tmb A / B es de 15 ML a 4 ° C para evitar la luz.

Líquido de terminación 15 ML a temperatura ambiente

Diluyente de muestra 30 ML 4 ° C

Procesamiento de muestras

Muestra de tejido

Pesar 0,1 g de tejido y añadir 1 ml de líquido de extracción homogeneizado de baño de hielo

10000g 4 ℃ centrifugación durante 10 minutos

Tomar el líquido claro para detectarlo inmediatamente o conservarlo a - 80 ° c (evitar congelación y deshielo repetidos)

Muestras celulares

Recoger la precipitación celular y añadir el extracto para romper

10000g 4 ℃ centrifugación durante 10 minutos

Recoger el líquido claro para la detección

Muestras de suero / líquido

Deje reposar a temperatura ambiente durante 2 horas o 4 ° C durante la noche.

1000g centrifugado durante 20 minutos

Recoger el líquido claro para la detección

Precauciones:

Evitar la Hemólisis de la muestra

Nan3 inhibe la actividad de HRP

Se dan prioridad a las muestras frescas y las muestras congeladas evitan la congelación y descongelación repetidas.

pasos de operación

Preparación de reactivos: todos los reactivos se equilibran a temperatura ambiente (20 - 25 ° c) antes de su uso

Añadir muestra:

Agujero estándar: 50 μl de estándar de diferentes concentraciones

Agujero de la muestra: 50 μl de muestra a medir

Agujeros en blanco: sin agregar

Wenyu: añadir 100 μl de anticuerpos estándar enzimáticos a cada agujero, 37 ° C para evitar la luz durante 60 minutos

Lavado: añadir 350 μl de detergente por agujero, Dejar reposar durante 1 minuto y secar, repetir 5 veces

Color: añadir 50 μl de sustratos a y B por agujero, 37 ° C para evitar la luz durante 15 minutos

Terminación: 50 μl de líquido de terminación por agujero

Determinación: determinación del valor de do de 450 nm con un medidor de enzima en 15 minutos

Cálculo de los resultados

Dibuja la curva estándar con la concentración estándar como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical.

La concentración se obtiene en la curva estándar de acuerdo con el valor de od de la muestra.

Concentración de la muestra = concentración medida × múltiplo de dilución (en su caso)

Indicadores de rendimiento

Rango de detección: 18 - 650 u / L

Sensibilidad: ≤ 5 u / L

Coeficiente de variación dentro del lote: < 10%

Coeficiente de variación entre lotes: < 15%

Precauciones

El kit tiene una validez de 6 meses y se conserva a 2 - 8 ° C

Los reactivos de diferentes lotes no se pueden mezclar

Conservación de la solución de color a prueba de luz

El lavado sucio puede causar falsos positivos

El líquido de terminación contiene sustancias corrosivas y debe protegerse durante la operación.

Todos los residuos se tratan de acuerdo con los peligros biológicos.

Instrumentos necesarios

Medidor de estándar enzimático (filtro de 450 nm)

Pipeta de precisión (0,5 - 1000 μl)

Incubadora de 37 ° C

Lavadora de placas (opcional)

Mezclador de vórtice

Nota: para la investigación científica, la información anterior para referencia, no se utiliza como base experimental, consulte al profesor de tecnología o al comerciante de marca.

Tianjin bensheng siempre ha considerado el control de calidad como la vida de la empresa y ha buscado la mejora continua de la competitividad de la empresa. La compañía siempre se adhiere en su operación: cumplir con la ley, ser estricta consigo misma, ser indulgente y benevolente, atreverse a asumir el espíritu empresarial como estándar, mantener y expandir el mercado con excelente calidad y excelente servicio, y satisfacer en gran medida las necesidades de los clientes. La situación beneficiosa para todos con nuestros clientes es nuestro objetivo de desarrollo.