Instrucciones técnicas del kit de prueba Elisa del factor de crecimiento epidérmico porcino (egf)

Kit de Elisa del factor de crecimiento epidérmico porcino (egf) BS - 4568

I. Resumen del producto

Este Kit utiliza la tecnología de inmunoabsorción enzimática de doble sándwich de anticuerpos, que se utiliza específicamente para la detección cuantitativa del factor de crecimiento epidérmico (egf) en suero porcino, plasma, homogeneizado de tejidos y sobrenadante de cultivo celular. Los productos son solo para investigación científica y son adecuados para la regulación del crecimiento de los cerdos, la investigación de modelos de enfermedades y otros campos.

II. principios de detección

¿‌ recubrimiento de anticuerpos sólidos: preenvasar anticuerpos monoclonales contra el EGF porcino en microporos para formar un vector sólido?

Respuesta de anticuerpos antigénicos: el feag en la muestra se une a anticuerpos sólidos y luego se añade el anticuerpo secundario marcado por biotina para formar un complejo sándwich.

Color vinculado a la enzima: la streptavidina marcada por HRP se añade para catalizar el color del sustrato tmb, y la profundidad del color está positivamente relacionada con la concentración de EGF en la muestra.

Análisis cuantitativo: determinación de la absorción a una longitud de onda de 450 nm y cálculo de la concentración a través de la curva estándar

III. composición del kit

Condiciones de conservación de las especificaciones de los componentes

El prepago está sellado con 96 agujeros por placa microporosa a 2 - 8 ℃.

Producto estándar (liofilizado) 6 tubos - 20 ℃.

Estándar enzimático dos resistencias a 6 ML 2 - 8 ℃ para evitar la luz

El agente de color A / B líquido es de 6 ml de 2 - 8 ℃ cada uno para evitar la luz.

Líquido de terminación 6 ML a temperatura ambiente

20 × tampón de lavado 20 ml a temperatura ambiente

Diluyente de muestra 6 ML 2 - 8 ° C

Instrucciones 1 copia -

IV. procesamiento de muestras

Requisitos de recolección:

Suero / plasma: anticoagulación edta, centrifugación después de la precipitación estática del suero (3000rpm × 15 min)

Homogeneizado de tejido: añadir solución salina normal a 1: 9 para moler, centrifugar y limpiar

Sobrenadante celular: centrifugación de 1000rpm durante 10 minutos para eliminar impurezas

Condiciones de conservación:

Corto plazo: 2 - 8 ° c (≤ 3 días)

A largo plazo: - 20 ° c (evitar congelación y deshielo repetidos)

V. pasos operativos

Dilución estándar:

Preparar 480pg / ml de la solución original con una dilución estándar y diluirla a 0pg / ML con un gradiente doble.

Secuencia de dilución: 480 → 240 → 120 → 60 → 30 → 0pg / ML

Reacción de muestra adicional:

Añadir 50 μl de estándar / muestra por agujero, sin agujeros en blanco

Incubar a 37 ° C durante 30 minutos y lavar la placa 5 veces.

Reacción enzimática:

Añadir 50 μl de doble resistencia estándar enzimática e incubar a 37 ° C durante 30 minutos

Después de lavar la placa, agregue el líquido de color tmb para evitar la reacción de la luz durante 10 minutos.

Terminación de la determinación:

Añadir 50 μl de líquido de terminación y medir la absorción de 450 nm en 30 minutos

VI. cálculo de los resultados

Dibuja la curva estándar con la concentración estándar (pg / ml) como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical.

Concentración de la muestra = valor de ajuste de la curva estándar × múltiplo de dilución de la muestra (se recomienda diluir 5 veces)

VII. parámetros de rendimiento

Parámetros del indicador

Rango de detección 7,8 - 500pg / ML

Sensibilidad 2,51 pg / ML

批内精密度 CV <6,6%

Precisión entre lotes CVS inferior al 7,9%

Tasa de recuperación 91 - 109%

Nota: lo anterior es solo para referencia, no como datos reales, los experimentos deben seguir estrictamente las instrucciones o consultar a los profesores técnicos. Kit de Elisa

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