Instrucciones técnicas del kit de prueba Elisa de Lignina microbiana (lignin)

Kit de Elisa de Lignina microbiana BS - 5184 (lignin)

1. Resumen del producto

Este Kit utiliza el método de inmunoabsorción enzimática de doble sándwich de anticuerpos (elisa) para la detección cuantitativa del contenido de Lignina en muestras como fermentados microbianos y lisados celulares. La Lignina es un polímero aromático producido durante el metabolismo microbiano o la degradación de las paredes celulares de las plantas, y sus cambios de contenido pueden reflejar la eficiencia de uso de la lignocellosa por parte de los microorganismos.

2. principio de detección

Los paquetes de anticuerpos sólidos son capturados por placas microporosas de la Lignina en la muestra, y luego se añaden marcadores enzimáticos para detectar anticuerpos para formar un complejo de 'anticuerpos - antígenos - anticuerpos marcados enzimáticos'. Después del lavado, se agregó un sustrato tmb para colorear, y la absorción se determinó a una longitud de onda de 450 nm, y el valor de absorción se relacionó positivamente con la concentración de lignina.

3. composición del kit

Componente 96 agujeros configuración 48 agujeros configuración condiciones de conservación

Placa estándar de enzima microporosa 12 agujeros x 8 agujeros x 4 tiras selladas y secas a 2 - 8 ℃.

Producto estándar (lignina) 0,5 ML × 6 tubos 0,5 ML × 6 tubos - 20 ℃ para evitar la luz

Diluyente de muestra 6 ML 3 ML 2 - 8 ° C

Anticuerpos estándar enzimáticos - hrp 10 ml 5 ML 2 - 8 ℃ para evitar la luz

20 × tampón de lavado 25 ML 15 ML a temperatura ambiente

El líquido de color tmb es de 9 ML 4,5 ML 2 - 8 ℃ para evitar la luz.

Líquido de terminación 9 ML 4,5 ML a temperatura ambiente

Dos películas de sellado y dos a temperatura ambiente

4. procesamiento de muestras

4.1 caldo de fermentación microbiana

8000 × G centrifugación durante 10 minutos para eliminar el hongo

Tomar el líquido claro para detectar inmediatamente o congelar a - 80 ℃ (evitar congelación y deshielo repetidos)

4.2 lisado celular

12000 × G centrifugación 15 minutos después de la rotura por ultrasonido

Después de tomar el líquido claro y diluirlo 10 veces con pbs, se detecta.

4.3 precauciones

La turbidez de la muestra requiere filtración por membrana filtrante de 0,22 micras.

Evitar el uso de muestras que contengan Azida de sodio (inhibir la actividad de hrp)

5. pasos experimentales

5.1 preparación de reactivos

Tampón de lavado: agua destilada diluida 20 veces a 1 × líquido de trabajo

Gradiente estándar: diluir a 0 - 60 μg / ML según las instrucciones

5.2 adición de muestras

El estándar / muestra se agrega a los microporos correspondientes en 50 μl cada uno.

Incubar a 37 ° C durante 30 minutos

5.3 lavado

Añadir 300 μl de detergente por agujero y Dejar reposar durante 1 minuto y secar.

Repetir 5 veces

5.4 color

100 μl de anticuerpos estándar enzimáticos por agujero, incubados a 37 ° C durante 30 minutos

Después del lavado, agregue 90 μl de líquido de color tmb para evitar la luz durante 15 minutos.

Añadir 50 μl de líquido de terminación para detener la reacción

5.5 determinación

Longitud de onda de 450 nm para determinar el valor de od (longitud de onda de referencia de 630 nm)

6. cálculo de los resultados

La curva estándar se dibuja tomando la concentración del producto estándar como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical. La concentración de la muestra se calcula a través de una ecuación de curva, que debe diluirse más allá del rango y volver a medirse.

7. indicadores de rendimiento

Indicadores de parámetros

Sensibilidad ≤ 0,5 μg / ML

Rango de detección 1 - 60 μg / ML

CVS en lotes de precisión inferior al 8% y CVS entre lotes inferior al 12%

Tasa de recuperación 85% - 115%

8. precauciones

El kit debe equilibrarse a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de su uso.

Los reactivos de diferentes lotes no se pueden mezclar

El líquido de terminación contiene ácido fuerte y lleva equipo de protección durante la operación.

La solución de color evita el contacto con iones metálicos

El micropipeta debe calibrarse para evitar la contaminación cruzada

9. período de validez

6 meses (conservación a 2 - 8 ° c)

10. declaraciones

Este producto es solo para investigación científica.

Nota: lo anterior es solo para referencia, este reactivo es solo para investigación científica, no como datos reales, el experimento debe seguir estrictamente las instrucciones o consultar al profesor técnico.

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