Instrucciones de uso experimental del kit de Elisa del factor de crecimiento endoteliales vascular humano a (vegf - a)

Kit de Elisa BS - 9809 factor de crecimiento endoteliales humano a (vegf - a)

I. Resumen del producto

Este Kit utiliza el método de inmunoabsorción enzimática de doble sándwich de anticuerpos (elisa) para detectar la concentración de factor de crecimiento tumoral - a en muestras de suero humano, plasma, homogeneizado de tejidos y sobrenadante de cultivo celular. Solo para investigación científica.

II. composición del kit

Preenvasada por microporos‌ 12 hoyos x 8 (especificación de 96 hoyos) o 12 hoyos x 4 (especificación de 48 hoyos), preenvasada por anticuerpos capturados por Anti - vegf - A.

‌ estándar: polvo liofilizado, es necesario diluirlo con una dilución estándar después de la resolución (gradiente de concentración recomendado: 10, 3,33, 1,11, 0,37, 0,12, 0,04, 0 ng / ml).

Detección de anticuerpos - hrp‌ anticuerpos anti - vegf - a marcados con superóxidasa de rábano picante.

Tampón de lavado: 20 × concentrado, debe diluirse a 1: 20 con agua destilada.

Solución de sustrato A / b: solución de color tmb, mezclada 1: 1 antes de su uso, agotada en 15 minutos.

Líquido de terminación: solución de 2m.

Diluyente de muestra‌ utilizado para diluir muestras de alta concentración.

Película de sellado: 2 hojas para sellar la placa microporosa durante el calentamiento.

III. principios experimentales

El factor de crecimiento tumoral - A se une a los anticuerpos capturados preenvasados para formar un complejo "anticuerpo - antígeno"; Después de agregar el marcador HRP para detectar anticuerpos, se forma una "estructura sándwich". Después de lavar y eliminar la sustancia no unida, se añade el sustrato tmb para colorear (azul), y el líquido final termina la reacción y se vuelve amarillo. La longitud de onda de 450 nm determina la Absorbancia (valor de od), y la concentración es proporcional al valor de od.

IV. pasos experimentales

Preparación de la muestra

Suero / plasma: centrifugación para eliminar partículas y evitar la hemólisis; 2 - 8 ℃ conservación ≤ 48 horas, conservación a largo plazo necesita - 20 ℃ / - 80 ℃ (evitar congelación y deshielo repetidos).

Sobrenadante celular: retire el sobrenadante por centrifugación para evitar altas concentraciones de proteasa.

Preparación del reactivo

Detergente: cuando el detergente concentrado se cristaliza a temperatura ambiente, se diluye a 1: 20 después de disolverse en un baño de agua a 40 ° c.

Estándar: después de la resolución, se diluye la relación doble, y ahora se utiliza.

Sustrato: el líquido tmb A / B se mezcla 1: 1 y se conserva protegido de la luz.

Proceso de operación

Añadir muestra: añadir 100 μl de estándar / muestra por agujero e incubar a 37 ° C durante 90 minutos.

Lavado: secar el líquido en el agujero, remojarlo en detergente durante 1 minuto / vez y repetirlo 3 veces.

Añadir anticuerpos de detección: añadir 100 μl de anticuerpos marcados con HRP a cada agujero e incubar a 37 ° C durante 60 minutos.

Lavado: salto simultáneo 2.

Color: añadir 90 μl de sustrato tmb por agujero e incubar a 37 ° C para evitar la luz durante 15 - 20 minutos.

Terminación: añadir 100 μl de líquido de terminación a cada agujero y medir el valor de od dentro de los 30 minutos posteriores a la mezcla.

Cálculo de los resultados

La curva estándar se dibuja tomando la concentración de producto estándar (ng / ml) como Coordenadas horizontales y el valor de od como coordenadas longitudinales.

La concentración se calcula de acuerdo con la curva de sustitución del valor od de la muestra y se multiplica por el múltiplo de dilución para obtener el resultado.

V. precauciones

Conservación del reactivo: el kit no utilizado debe conservarse a 2 - 8 ° C para evitar la luz, con una validez de 6 meses; Los estándares de resolución se pueden congelar por separado para evitar la congelación y el deshielo repetidos.

Procesamiento de muestras: evite usar las muestras incluidas y evite la actividad de hrp.

Especificaciones de operación: es necesario transferir líquido para evitar burbujas; Es necesario lavarse para evitar la contaminación cruzada.

Protección de seguridad: el líquido de terminación contiene ácido fuerte y necesita usar guantes para operar.

VI. resultados previstos

Sensibilidad: ≤ 1,54 pg / ML (en realidad, prevalecerán las instrucciones).

Rango de detección: el rango típico es de 3,12 - 200 pg / ml, y algunos kits se extienden a 62,5 - 2000 pg / ML.

Repetibilidad: coeficiente de variación intraplaca / intraplaca inferior al 10% y inferior al 15%, respectivamente.

7. preguntas y respuestas frecuentes

¿P‌ el color es demasiado claro o demasiado oscuro?

A: ajustar el múltiplo de dilución de la muestra o el tiempo de incubación; Asegúrese de que el sustrato esté recién preparado.

¿P‌ diferencia lineal de la curva estándar?

A: comprobar la operación de resolución para evitar burbujas; Reemplace la cabeza de succión del pipeta.

Nota: lo anterior es solo para referencia. este producto es solo para investigación científica y no se utiliza como datos reales. los experimentos deben seguir estrictamente las instrucciones o consultar a los profesores técnicos.

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