Manual técnico del kit de prueba ELISA para la IL - 23 humana

BS - 0194 humana il 23 (il - 23) Kit Elisa kit bensheng

I. Resumen del producto

Este Kit utiliza la tecnología de la prueba de inmunoabsorción enzimática de doble sándwich de anticuerpos (elisa) para la detección cuantitativa de la concentración de IL - 23 en suero humano, plasma, homogeneizado de tejidos y sobrenadante celular. ‌ los componentes centrales incluyen placas estándar enzimáticas, estándares, anticuerpos de detección marcados con biotina y sustratos de color (tmb) preenvasados para garantizar una alta sensibilidad (tan baja como 0,15 pg / ml) y especificidad. El experimento dura unas 3,5 horas y es adecuado para experimentos de investigación científica, y el uso de diagnóstico clínico está estrictamente prohibido. ¿‌ sí?

II. principios de detección

Unión de anticuerpos: la IL - 23 se une a los anticuerpos capturados preenvasados para formar un complejo. ¿‌ sí?

Añadir la estreptomicina marcada por la biotinización para detectar anticuerpos y la superóxidasa de rábano picante para colorear a través de una reacción enzimática.

Análisis cuantitativo: después de que el sustrato tmb se colorea, el líquido termina la reacción, el valor de absorción se mide a 450 nm, y la concentración de IL - 23 está positivamente relacionada con el valor de od. ¿‌ sí?

III. composición del kit

Componentes | especificaciones / cantidades | Condiciones de almacenamiento

| - | - -

| placa estándar de enzima preenvasada | 96 agujeros / placa | 2 - 8 ℃ para evitar la luz

| productos estándar (polvo liofilizado) | 2 botellas | - 20 ℃ conservación a largo plazo

| anticuerpos marcados con biotina | 1 unidad (concentrado) | 2 - 8 ° C a corto plazo

| sustrato de color (tmb) | 12 ML | 2 - 8 ° C para evitar la luz

| líquido de terminación | 12 ML | temperatura ambiente

| 20 × detergente | 50 ml | temperatura ambiente

Nota: el diluyente de la muestra debe seleccionarse de acuerdo con el tipo de muestra (suero / plasma / sobrenadante celular).

IV. procesamiento de muestras

Suero / plasma‌ coagulación a temperatura ambiente durante 30 minutos, centrifugación 1000 × G durante 15 minutos, extracción de líquido sobrenadante para evitar la hemólisis.

Desbridamiento celular: centrifugación directa para eliminar fragmentos celulares, las muestras no detectadas deben conservarse a - 20 ℃ después del embalaje para evitar la congelación y descongelación repetidas.

Homogeneizado de tejido: añadir el homogeneizado de lisado de acuerdo con el peso del tejido y centrifugarlo para eliminarlo. ¿‌ sí?

V. pasos operativos

Equilibrio del reactivo: todos los componentes se dejan reposar a temperatura ambiente durante 20 minutos y el baño de agua del detergente concentrado se disuelve y cristaliza. ¿‌ sí?

Reacción de muestra adicional:

Después de la dilución del gradiente estándar, se añade el agujero estándar de la enzima, y el volumen de la muestra es de 25 μl. ¿‌ sí?

Se agregaron anticuerpos de detección y complejos de etiquetas enzimáticas a su vez, y se incubaron a 37 ° C durante 60 minutos.

Color de lavado: lavar el detergente tres veces, añadir el sustrato tmb para evitar la luz durante 15 minutos y terminar el líquido. ¿‌ sí?

Lectura: El medidor estándar enzimático mide el valor de od a una longitud de onda de 450 nm y ajusta la concentración calculada con cuatro parámetros.

VI. parámetros de rendimiento

Rango de detección: 15,6 - 1000 pg / ML (intervalo lineal).

Sensibilidad: 0,15 pg / ML.

Precisión: coeficiente de variación dentro / entre placas (cvs) inferior al 10%. ¿‌ sí?

Tasa de recuperación: 80% - 120%.

VII. precauciones

Protección de seguridad: use guantes y gafas protectoras durante la Operación para evitar el contacto con el líquido de terminación y el sustrato tmb. ¿‌ sí?

Conservación del reactivo: se puede conservar durante 6 meses sin abrir el kit 2 - 8 ° C y durante 1 año a - 20 ° c; Los reactivos abiertos se agotarán en un plazo de 7 días.

Especificaciones experimentales:

Está prohibido mezclar diferentes lotes de reactivos. ¿‌ sí?

Al lavarse, seque la placa estándar de la enzima para evitar que el papel absorbente de agua entre en contacto directo con el agujero. ¿‌ sí?

La reacción de color debe protegerse de la luz y leerse dentro de los 30 minutos posteriores a la terminación.

Nota: lo anterior es solo para referencia, no como datos reales, los experimentos deben seguir estrictamente las instrucciones o consultar a los profesores técnicos.