Instrucciones técnicas del kit de prueba Elisa de la IL - 22 humana

Kit de Elisa de la IL - 22 humana BS - 1649

I. Resumen del producto

Este Kit utiliza el método de inmunoabsorción enzimática de doble sándwich de anticuerpos (elisa) para detectar cuantitativamente la concentración de IL - 22 en suero humano, plasma o sobrenadante de cultivo celular. La IL - 22 es una citoquina secretada por células T activadas, células nk, etc., que desempeña un papel importante en la respuesta inflamatoria, la reparación de tejidos y la inmunomodulación. Este Kit tiene las características de alta sensibilidad, alta especificidad y buena repetibilidad, y es adecuado para experimentos científicos y pruebas clínicas.

II. principios de detección

‌ anticuerpos envueltos: los anticuerpos monoclonales contra la IL - 22 humana se preenvasan en microporos y se unen a la IL - 22 en la muestra para formar un complejo sólido.

Anticuerpos marcados con biotina‌ anticuerpos anti - IL - 22 humanos marcados con biotina añadidos, Unidos a la IL - 22 para formar una estructura sándwich.

‌ Unión enzimática: se añade la estreptomicina marcada por la superóxidasa de rábano picante (hrp) y se une específicamente a la biotina.

Reacción de color: añadir sustrato (tmb) para mostrar el color, la profundidad del color es directamente proporcional a la concentración de IL - 22.

Terminación y determinación: añadir líquido de terminación para terminar la reacción, determinar la absorción (valor de do) a una longitud de onda de 450 nm y calcular la concentración de la muestra a través de la curva estándar.

III. composición del kit

Número de especificaciones de los componentes

Placa microporosa preenvasada 96 agujeros / placa 1 pieza

Producto estándar (liofilizado) 2ng / rama 2

Diluyente estándar 10 ml 1 botella

Anticuerpos marcados con biotina 6ml 1 vial

HRP marca la estreptomicina 6ml 1 vial

Detergente (20 ×) 50 ml 1 botella

Líquido de color (tmb) 11 ML 1 botella

Líquido de terminación (2mh so) 6 ML 1 botella

IV. requisitos de la muestra

Suero / plasma‌ después de la recolección, se deja reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos, se centrifuga (2000 × g, 15 minutos) para extraer el suero superior y se conserva a - 20 ° c o - 80 ° C para evitar la congelación y descongelación repetidas.

Sobrenadante de cultivo celular: centrifugación para eliminar fragmentos celulares, detección inmediata o conservación en paquetes.

‌ precauciones: evite contener conservantes como Azida de sodio (nan) o EDTA en la muestra para no afectar los resultados de la prueba.

V. pasos operativos

Dilución estándar: volver a disolver el estándar liofilizado en 2ng / ML con una dilución estándar y diluirlo en proporción doble (por ejemplo, 2ng / ml, 1ng / ml, 0,5 ng / ml, 0,25 ng / ml, 0125ng / ml, 0,06 ng / ml), y el agujero 0ng / ML es un control en blanco.

Añadir muestra: añadir 100 μl de estándar o muestra por agujero e incubar a 37 ° C durante 90 minutos.

Lavado: descartar el líquido del agujero y lavar la placa con detergente tres veces, remojando durante 1 minuto cada vez.

Añadir anticuerpos marcados con biotina‌ añadir 100 μl por agujero e incubar a 37 ° C durante 60 minutos.

Unión enzimática añadida: añadir 100 μl por agujero e incubar a 37 ° C durante 30 minutos.

Color y terminación: añadir 90 μl tmb por agujero, evitar la luz y el color durante 15 minutos, y añadir 50 μl de líquido de terminación.

Determinación: leer el valor de od a una longitud de onda de 450 nm, dibujar la curva estándar y calcular la concentración de la muestra.

VI. cálculo de los resultados

Tomando la concentración estándar como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical, se dibuja la curva estándar.

La concentración correspondiente en la curva estándar se basa en el valor de od de la muestra, multiplicado por el múltiplo de dilución (si la muestra no se diluye, multiplicado por 1).

Se recomienda el uso de un software profesional, como Elisa calc, para el ajuste de la curva y el cálculo de la concentración.

VII. indicadores de rendimiento

Sensibilidad: el límite de detección es de 0015 ng / ML.

Precisión: coeficiente de variación dentro del lote (cvs) inferior al 10% y CVS entre lotes inferior al 15%.

Rango lineal: 00625 - 2ng / ml, coeficiente de correlación (r m2) > 0,99.

Tasa de recuperación: se reciclan muestras de alta, media y baja concentración, con una tasa de recuperación entre el 85% y el 115%.

‌ especificidad: no se producen reacciones cruzadas con citocinas como IL - 10, IL - 17 e il - 23.

8. precauciones

Conservación del reactivo: el kit sin abrir se conserva a 2 - 8 ° c, con una validez de 12 meses; Después de la apertura, los estándares, los anticuerpos marcados con biotina y los marcadores de HRP deben ser empaquetados y congelados para evitar la congelación y descongelación repetidas.

Código de operación: evite la generación de burbujas al mover el líquido y asegúrese de que el líquido en el agujero se abandone al lavarse.

Protección de seguridad: el líquido de terminación contiene ácido fuerte, use guantes y gafas protectoras durante la operación.

Control de calidad: cada lote de experimentos debe establecer una reinspección de doble agujero, y si el valor de od es anormal, debe repetir la detección.

9. análisis de cuestiones comunes

Posibles causas del fenómeno del problema y soluciones

Desviación lineal de la curva estándar desviación estándar dilución incorrecta reorganización estándar para garantizar la dilución de la relación doble

El valor de od de la muestra es demasiado alto, la concentración de la muestra excede el rango de detección y diluye la muestra antes de volver a detectarla.

Período de validez del reactivo de inspección de inactivación del complejo enzimático con color demasiado claro o sin color, reemplazar el nuevo reactivo

Después del lavado, hay líquidos residuales en el agujero que no se lavan lo suficiente o no son lo suficientemente fuertes para aumentar el número de lavados, golpeando con fuerza la placa del agujero seco.

Nota: lo anterior es solo para referencia, este reactivo es solo para investigación científica, no como datos reales, el experimento debe seguir estrictamente las instrucciones o consultar al profesor técnico.

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