Manual técnico del kit de prueba ELISA para la IL - 17 humana

Kit de Elisa BS - 9770 humana il 17 (il - 17)

I. Resumen del producto

Este Kit utiliza el método de inmunoabsorción enzimática de doble sándwich de anticuerpos (elisa) para la detección cuantitativa de la IL - 17 en muestras de suero humano, plasma y líquidos biológicos relacionados. La IL - 17 es una citoquina proinflamatoria secretada por las células th17 y juega un papel clave en las enfermedades autoinmunes y la respuesta inflamatoria.

II. principios de detección

Técnica de sándwich de doble anticuerpo:

El preembalaje fue capturado con il - 17 en una muestra de microplaca resistente al Anticuerpo monoclonal IL - 17 humano.

Se agregó un anticuerpo secundario marcado por la enzima de rábano picante (hrp) para formar un complejo de "anticuerpos - antígenos - anticuerpos estándar enzimáticos".

A través de la reacción de color tmb, la profundidad del color está positivamente relacionada con la concentración de IL - 17, y la Absorbancia (valor de od) se determina a una longitud de onda de 450 nm.

III. composición del kit

Especificaciones de los componentes (configuración de 96 agujeros) condiciones de conservación

Placa de cubierta estándar de enzima 1 × 96 agujeros 2 - 8 ℃.

Estándar (270ng / l) 0,5 ML × 1 botella 2 - 8 ° c (largo - 20 ° c)

Diluyente estándar 1,5 ML × 1 botella 2 - 8 ℃.

Reactivo estándar enzimático 6ml × 1 vial 2 - 8 ° C

Diluyente de muestra 6 ML × 1 vial 2 - 8 ° C

El agente de desarrollo de color A / B líquido 6 ML × 1 botella 2 - 8 ℃ evita la luz cada uno.

Líquido de terminación 6 ML × 1 botella 2 - 8 ° C

Detergente concentrado 20ml × 30 veces × 1 botella 2 - 8 ℃.

Instrucciones 1 copia a temperatura ambiente

IV. requisitos para el procesamiento de muestras

Suero / plasma:

Deje reposar a temperatura ambiente durante 10 - 20 minutos, 2000 - 3000 RPM / corazón separado durante 20 minutos y retire el líquido limpiador superior.

Evitar la congelación y el deshielo repetidos, si se produce precipitación, es necesario volver a centrifugar

Sobrenadante de cultivo celular:

Después de la centrifugación, se extrae el sobrenadante y se necesita una operación estéril para detectar componentes secretores.

Homogeneizado de orina / tejido:

Después de centrifugar la orina, se extrae el suero superior; Las muestras de tejido deben homogeneizarse y separarse por centrifugación.

V. pasos operativos

Dilución de productos estándar:

Estándar de dilución de gradiente (por ejemplo, 270ng / l a 1ng / l), 50 μl de muestra por agujero

Muestra añadida:

Después de diluir la muestra, agregue 10 μl a los microporos y agregue 40 μl de muestra (dilución total 5 veces)

Wen yu:

Reacción de protección de la luz a 37 ° C durante 30 minutos, cubierta por película de sellado

Lavado:

Remoje el detergente durante 1 minuto / vez, repita 3 - 5 veces y seque el líquido en el agujero.

Color y terminación:

Añadir el líquido de color tmb para evitar la reacción de la luz durante 15 - 20 minutos y terminar la reacción con el líquido.

Lectura:

El medidor estándar enzimático mide el valor de od a una longitud de onda de 450 nm y calcula la concentración a través de la curva estándar.

VI. indicadores de rendimiento

Sensibilidad: tan baja como 0,1 pg / ML (valor de referencia de IL - 17 en ratones), IL - 17 humano es de aproximadamente 3,8 pg / ML.

Rango de detección: 7,8 – 500pg / ML (valor de referencia IL - 17c humano), o 31,3 – 2000pg / ML (il - 17 humano).

Especificidad: no hubo respuesta cruzada con otros miembros de la familia IL - 17 (como IL - 17b, IL - 17f).

Repetibilidad: coeficiente de variación dentro / entre placas inferior al 10%

VII. precauciones

Condiciones de conservación:

El kit se conserva a 2 - 8 ° c, y el almacenamiento a largo plazo de los productos estándar requiere - 20 ° C

Período de validez:

6 meses (4 ° c), 12 meses (- 20 ° c).

Entorno experimental:

Para evitar la irradiación de luz fuerte, el líquido de color debe equilibrarse previamente a 37 ° c.

Viii. referencias

Principio y normas de funcionamiento del método de sándwich de doble anticuerpo

Guía para el procesamiento y conservación de muestras

Datos de verificación del rendimiento del kit

Nota: lo anterior es solo para referencia, no como datos reales, los experimentos deben seguir estrictamente las instrucciones o consultar a los profesores técnicos.

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