Manual técnico del kit de prueba Elisa de la enzima humana GSh - 4 (gpx4)

Kit de Elisa BS - 9843 humana GSh pod 4 (gpx4)

Resumen del producto

Este Kit utiliza el método de inmunoabsorción enzimática Sandwich en un solo paso de doble anticuerpo (elisa) para la detección cuantitativa in vitro de la concentración de GSh - peroxidasa 4 (gpx4) en muestras de suero humano, plasma, homogeneizado de tejido, lisado celular y sobrenadante de cultivo celular. El gpx4 es un miembro clave de la familia de la peroxidasa de gsh, que elimina la peroxidación lipídica a través de la reducción catalítica de GSh y desempeña un papel central en la inhibición de la muerte por hierro, el mantenimiento de la integridad de la membrana celular y el estrés antioxidante.

Principio de detección

‌ método de sándwich de doble anticuerpo: el anticuerpo envuelto se une al gpx4 en la muestra, el anticuerpo marcado por biotina forma un complejo, y la estreptomicina marcada por la superóxidasa de rábano picante (hrp) cataliza la reacción de color, que es proporcional a la concentración de gpx4 en la muestra.

Especificidad: gpx4 se puede identificar específicamente, sin reacciones cruzadas con análogos, lo que garantiza la precisión de la detección.

Composición del kit

Especificaciones / descripciones de los componentes

Placa microporosa preenvasada 96, que contiene anticuerpos contra la gpx4 humana

Polvo liofilizado estándar, proteína gpx4 humana recombinante, resolución con diluyente previo al uso

Líquido de anticuerpos marcado por biotina, anticuerpos marcados por HRP contra gpx4 humano

Sustrato cromático (tmb) líquido, 3,3 ', 5,5' - Solución de tetrametilbifenilamina

Solución de ácido sulfúrico 2M de líquido de terminación

Tampón de lavado 20 × concentrado, que contiene tween - 20

Tampón de diluyente de muestra para diluir muestras de alta concentración

La película de sellado es transparente para el sellado de placas microporosas.

Procesamiento y conservación de muestras

Tipo de muestra: suero, plasma, homogeneizado de tejido, lisado celular, sobrenadante de cultivo celular, etc.

Tratamiento:

Suero / plasma: centrifugado después de la coagulación a temperatura ambiente (3000 rpm, 10 minutos), se extrae el suero.

Homogeneizado de tejido: preparar un 10% de líquido homogeneizado con solución salina normal y extraer el líquido homogeneizado por centrifugación.

Lisado celular: centrifugado después de la lisis (15000 rpm, 10 minutos), despejado.

‌ condiciones de conservación: conservación a corto plazo (≤ 7 días) a 2 - 8 ° c, y congelación a largo plazo (> 7 días) a - 20 ° C para evitar la congelación y descongelación repetidas.

pasos de operación

Dilución de la norma: diluir la norma a 1000 con una dilución de muestra pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL、15.63 pg/mL，0 pg/mL Es un control en blanco.

Añadir muestra: añadir 100 μl de estándar o muestra por agujero e incubar a 37 ° C durante 90 minutos.

Lavado: deseche el líquido del agujero, llene cada agujero con líquido de lavado, deje reposar durante 30 segundos y deseche, repita 5 veces y seque.

Añadir anticuerpos marcados con biotina‌ añadir 100 μl de anticuerpos marcados con biotina a cada agujero e incubar a 37 ° C durante 60 minutos.

Sustrato de color añadido: añadir 90 μl de sustrato tmb por agujero e incubar a 37 ° C para evitar la luz durante 15 - 30 minutos.

Reacción de terminación: añadir 50 μl de líquido de terminación a cada agujero y medir la absorción inmediatamente después de mezclar bien.

Cálculo de los resultados

Configuración del instrumento: longitud de onda del medidor estándar enzimático 450 nm (longitud de onda de referencia 630 nm).

Procesamiento de datos: dibuja la curva estándar tomando la concentración de productos estándar (pg / ml) como Coordenadas horizontales y el valor de od como coordenadas longitudinales. La concentración de la muestra se calcula a través de una ecuación de curva, multiplicada por el múltiplo de dilución.

Sensibilidad: 7,69 pg / ml, rango de detección 15,62 - 1000 pg / ML.

Precauciones

Reacciones cruzadas: no se producen reacciones cruzadas con análogos como gpx1, gpx2 y gpx3.

Especificaciones de operación:

El lavado debe estar limpio para evitar que los líquidos residuales afecten los resultados.

El tiempo de color se controla en 15 - 30 minutos para evitar desviaciones de datos causadas por el color excesivo.

Las muestras evitan la congelación y el deshielo repetidos para evitar la degradación de las proteínas.

Control de calidad: se recomienda establecer una repetición de doble agujero en cada lote de experimentos, y el valor de CVS inferior al 10% está calificado.

Condiciones de almacenamiento

Kit sin abrir: conservar a 2 - 8 ° C para evitar la luz, válido por 6 meses.

Después de la apertura: los estándares, anticuerpos, sustratos y otros componentes se empacan y conservan de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para evitar la congelación y descongelación repetidas.

Esta instrucción solo se utiliza para fines científicos y no es adecuada para el diagnóstico clínico. Lea cuidadosamente las instrucciones completas antes de la operación y cumpla con las normas de seguridad del laboratorio.

Nota: para la investigación científica, la información anterior es para referencia.

El kit de Elisa de la GSh - 4 humana (gpx4) siempre ha considerado el control de calidad como la vida de la empresa y ha buscado la mejora continua de la competitividad de la empresa. La compañía siempre se adhiere en su operación: cumplir con la ley, ser estricta consigo misma, ser indulgente y benevolente, atreverse a asumir el espíritu empresarial como estándar, mantener y expandir el mercado con excelente calidad y excelente servicio, y satisfacer en gran medida las necesidades de los clientes. La situación beneficiosa para todos con nuestros clientes es nuestro objetivo de desarrollo.