Instrucciones del kit de prueba Elisa de daidzein de rata

Kit Elisa de glucosídeos de soja de rata BS - 8567 (daidzein)

Resumen del producto

Este Kit utiliza el método competitivo de inmunoabsorción enzimática (elisa) para la detección cuantitativa del contenido de daidzein en muestras biológicas como plasma, suero o homogeneizado de tejidos de ratas. Los glucosídeos de soja son flavonoides naturales, con actividades biológicas como antioxidantes, antiinflamatorios e inmunomoduladores, y están ampliamente presentes en plantas leguminosas. sus pruebas de contenido son esenciales para la investigación farmacológica y la evaluación nutricional. Este kit se basa en el principio de unión específica de antígenos y anticuerpos, y realiza una detección de alta sensibilidad a través de la amplificación de la señal de etiqueta enzimática, que es adecuada para el análisis de rutina de laboratorio.

Composición del kit

Placa microporosa preenvasada: 96 agujeros (12 × 8 agujeros), las tiras son desmontables y el paquete está cubierto con anticuerpos específicos de glucosídeos de soja.

Estándar: 6 gradientes de concentración (0,13 - 61,02 ng / ml), polvo liofilizado, resolución con diluyente estándar antes de su uso.

Marcador enzimático: antígeno competitivo marcado por la superóxidasa de rábano picante (hrp), conservado protegido de la luz marrón.

Sustrato de color: solución tmb, líquido transparente incoloro.

Solución de terminación: solución de ácido sulfúrico 2M para detener la reacción.

Detergente: 20 × tampón concentrado, que debe diluirse con agua desionizada para su uso.

Diluyente de muestra: se utiliza para ajustar la concentración de la muestra al rango de detección.

Película de sellado: 2 para sellado de microporos.

Instrucciones: 1 copia.

Condiciones de almacenamiento

Kit sin abrir: conservar a 2 - 8 ° C de la luz, válido durante 12 meses.

Después de la apertura: los productos estándar, los marcadores enzimáticos y los sustratos de color deben separarse y congelarse (- 20 ° c) para evitar la congelación y descongelación repetidas; La placa microporosa se seca y sella para su conservación.

Está prohibido congelar el detergente concentrado para evitar la precipitación cristalina.

Procesamiento de muestras

Muestras de plasma / suero: centrifugar inmediatamente después de la recolección (3000 rpm, 10 minutos), extraer el líquido sobrenadante y conservarlo a - 80 ° c. Evitar la hemólisis.

Homogeneizado de tejido: pesar el tejido, añadir el homogeneizado de solución salina normal (1: 9 W / v) y centrifugar el sobrenadante.

Precauciones: los glucosídeos de soja en la muestra pueden estar presentes en estado de unión, se recomienda usar la enzima beta - glucurónida para mejorar la sensibilidad de la detección. La muestra necesita centrifugación (5000 rpm, 10 minutos) o filtración (película de 0,22 micras) cuando está turbia.

Pasos experimentales

1. preparación de reactivos

Detergente: diluir 20 × concentrado a 1 × (por ejemplo, 10 ml de concentrado + 190 ml de agua) con agua desionizada.

Gradiente estándar: volver a disolver el estándar liofilizado con una dilución estándar y diluir el gradiente a 0,13, 0,39, 1,17, 3,51, 10,53, 61,02 ng / ML.

Dilución de la muestra: diluir la muestra a medir dentro del rango de detección con una dilución de la muestra (se recomienda determinar el múltiplo de dilución con un experimento previo).

2. adición de muestras e incubación

Añadir 100 μl de estándar o muestra por agujero (establecer un agujero en blanco y añadir solo una dilución de muestra).

Añadir 50 μl de marcador enzimático a cada agujero y mezclar bien.

Incubar a 37 ° C para evitar la luz durante 60 minutos.

3. lavado

Descartar el líquido en el agujero, añadir 350 μl de detergente a cada agujero, Dejar reposar durante 30 segundos y secarlo, repetir 5 veces y secarlo.

4. coloración y terminación

Se agregó un sustrato de color de 100 μl por agujero y se eclosionó a 37 ° C durante 15 minutos.

Añadir 100 μl de líquido de terminación a cada agujero y mezclar bien.

5. determinación

La Absorbancia (valor de do) se determina inmediatamente con un medidor estándar enzimático a una longitud de onda de 450 nm y una longitud de onda de referencia de 630 nm.

Cálculo de los resultados

Dibujo de la curva estándar: ajuste la curva lógica de cuatro parámetros con la concentración estándar (ng / ml) como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical (se recomienda usar software profesional).

Cálculo de la concentración de la muestra: de acuerdo con el valor de od de la muestra, se sustituye por la ecuación de la curva estándar y se multiplica por el múltiplo de dilución para obtener la concentración real.

parámetros de rendimiento

Sensibilidad: límite de detección 0,13 ng / ML.

Precisión: coeficiente de variación interna (cvs) inferior al 10% y CVS entre placas inferior al 15%.

Tasa de recuperación: 80 - 120% (método de verificación: experimento de recuperación estándar).

Rango lineal: 0,13 - 61,02 ng / ml, coeficiente de correlación R m2 ≥ 0,98.

Especificidad: tasa de reacción cruzada con compuestos estructurales similares, como la genisteína, inferior al 5%.

Precauciones

Especificaciones de operación: evitar que los marcadores enzimáticos y los sustratos de color entren en contacto con iones metálicos; Se determina dentro de los 30 minutos posteriores al desarrollo del color para evitar la atenuación de la señal.

Control de calidad: cada lote de experimentos debe contener curvas estándar y muestras de control de calidad (se recomiendan concentraciones altas, medias y bajas).

Protección de seguridad: el líquido de terminación contiene ácido fuerte y requiere guantes y gafas protectoras para operar.

Tratamiento de residuos: los residuos que contienen enzimas deben inactivarse antes de descartarse.

Preguntas y respuestas frecuentes

Baja señal: comprobar si el tiempo de incubación o la temperatura son insuficientes; Confirme si los pasos de lavado son suficientes.

Alto valor de fondo: puede ser debido a la falta de lavado o la interferencia del sustrato de la muestra, se recomienda aumentar el número de lavados o optimizar el preprocesamiento de la muestra.

Curva estándar anormal: los estándares de resolución deben mezclarse completamente para evitar que las burbujas afecten la precisión de la concentración.

Nota: este producto es solo para investigación científica y no sirve de base experimental. Las operaciones específicas deben basarse en las instrucciones reales del kit.

Tianjin bensheng, el kit de prueba Elisa de daidzein de rata, siempre ha considerado el control de calidad como la vida de la empresa y ha buscado la mejora continua de la competitividad de la empresa. La compañía siempre se adhiere en su operación: cumplir con la ley, ser estricta consigo misma, ser indulgente y benevolente, atreverse a asumir el espíritu empresarial como estándar, mantener y expandir el mercado con excelente calidad y excelente servicio, y satisfacer en gran medida las necesidades de los clientes. La situación beneficiosa para todos con nuestros clientes es nuestro objetivo de desarrollo. ¡Bensheng! Su socio de confianza. Estamos dispuestos a cooperar sinceramente con usted para crear un futuro mejor. Kit de bensheng