Instrucciones experimentales del kit de Elisa de la rata GSR

Kit de Elisa de la GSR de rata BS - 3507

I. principios experimentales

Este Kit utiliza el método de inmunoabsorción enzimática sandwich de doble anticuerpo (elisa) para detectar la actividad de la GSR en ratas. El paquete de anticuerpos anti - GSR de rata se colocó en una placa microporosa, y después de agregar la muestra a medir, el GSR en la muestra se unió al paquete de anticuerpos. Posteriormente, se añaden anticuerpos de detección marcados con biotina para formar un complejo de "anticuerpos - antígenos - anticuerpos marcados con enzimas". Después de agregar la estreptomicina (sabc) marcada por la superóxidasa de rábano picante (hrp), la Absorbancia (valor de od) se determinó a una longitud de onda de 450 nm a través del color del sustrato tmb, y el valor de od se relacionó positivamente con la concentración de GSR en la muestra.

II. composición del kit

Componente 48 agujeros configuración 96 agujeros configuración condiciones de conservación

Placa estándar de enzima preenvasada 8 × 6 8 × 12 2 - 8 ℃.

Producto estándar (liofilizado) 1 Unidad 1 Unidad 2 - 8 ℃.

Estándar / diluyente de muestra 10 ml 15 ML 2 - 8 ℃.

Detección de anticuerpos biotinizados 60 μl (100 ×) 120 μl (100 ×) - 20 ℃.

Diluyente de anticuerpos biotinizados 6ml 12ml 2 - 8 ℃.

Complejo SABC 6ml 12ml 2 - 8 ℃.

El líquido de color tmb (a / b) es de 3 ML cada uno y 6 ML cada uno para evitar la luz 2 - 8 ℃.

Líquido de terminación 6 ML 12 ML 2 - 8 ℃.

20 × detergente concentrado 30 ML 60 ML a temperatura ambiente

Película de sellado 2 tabletas 4 tabletas a temperatura ambiente

Instrucciones 1 copia 1 copia -

III. procesamiento de muestras

Muestras de suero / plasma:

Toda la sangre se dejó reposar a temperatura ambiente durante 2 horas o 4 ° C durante la noche, se centrifugaron 1000g durante 20 minutos y se extrajo el suero.

Evitar muestras de Hemólisis o hiperlipidemia y conservarlas durante 48 horas a 2 - 8 ° c; La conservación a largo plazo requiere - 20 ℃ o - 80 ℃, evitando la congelación y descongelación repetidas.

Muestras de tejido / célula:

Después de homogeneizar el tejido o la lisis celular, se extrae el sobrenadante por centrifugación y la concentración de proteínas se ajusta al rango recomendado.

IV. pasos experimentales

Preparación del detergente:

Diluir 20 × detergente concentrado 20 veces con agua destilada (como 1 ml de concentrado + 19 ml de agua destilada).

Dilución estándar:

Tome siete tubos centrífuga y marque 1 / 2, 1 / 4, 1 / 8, 1 / 16, 1 / 32, 1 / 64, en blanco.

Añadir 200 μl de diluyente estándar / muestra a cada tubo, añadir 200 μl de diluyente estándar a la primera tubería y diluirlo paso a paso después de mezclar bien.

Añadir muestra e incubar:

Añadir 100 μl de estándar o muestra por agujero e incubar a 37 ° C durante 90 minutos.

Desechar el líquido y lavarlo 3 veces (1 - 2 minutos cada vez).

Respuesta de anticuerpos marcada por enzimas:

Se añaden 100 μl de biotina a cada agujero para detectar anticuerpos (diluidos a 1: 100) y se incuban a 37 ° C durante 60 minutos.

Lavar 3 veces.

Reacción del complejo sabc:

Se agregó un complejo SABC de 100 μl por agujero y se incubaron a 37 ° C durante 30 minutos.

Lavar 3 veces.

Color y terminación:

Añadir 90 μl de líquido de color tmb (mezcla de líquido A / B en la misma cantidad) por agujero y incubar a 37 ° C para evitar la luz durante 15 minutos.

Añadir 50 μl de líquido de terminación a cada agujero y mezclar para determinar inmediatamente.

V. cálculo de los resultados

Tomando la concentración estándar como coordenada horizontal (x) y el valor de od como coordenada vertical (y), se dibuja la curva estándar.

La concentración de GSR se calcula de acuerdo con la ecuación de la curva estándar de sustitución del valor od de la muestra.

6. precauciones

Conservación del reactivo:

Los productos estándar y los anticuerpos biotinizados deben conservarse a - 20 ° C para evitar la congelación y descongelación repetidas; Otros componentes se conservan a 2 - 8 ° c.

Procesamiento de muestras:

Evitar el uso de muestras de hemólisis, hiperlipidemia o turbidez; Las muestras de tejido deben estar bien homogeneizadas.

Especificaciones de operación:

La transferencia de líquido debe ser precisa para evitar la contaminación cruzada; Las necesidades de lavado, los líquidos residuales afectan los resultados.

Calibración del instrumento:

La longitud de onda del medidor de estándar enzimático debe calibrarse a 450 nm, y el agujero en blanco debe ajustarse a cero.

Protección de seguridad:

El líquido de terminación contiene ácido sulfúrico y lleva guantes y gafas protectoras durante la operación.

VII. resultados previstos

Sensibilidad: se puede detectar un GSR tan bajo como 0156 ng / ML.

Rango lineal: 0156 - 10ng / ML.

8. alcance de la aplicación

Este Kit es adecuado para la detección cuantitativa de GSR en suero, plasma, homogeneizado de tejidos y sobrenadante de cultivo celular de ratas, y su uso científico.

Consejo: las operaciones específicas deben basarse en las instrucciones reales del kit. antes del experimento, debe leer las instrucciones completas y confirmar la integridad de los componentes.

Nota: lo anterior es solo para referencia, este reactivo es solo para investigación científica, no como datos reales, el experimento debe seguir estrictamente las instrucciones o consultar al profesor técnico.